雌激素和孕激素对不同发情方式小鼠子宫内膜中孕激素受体分布的影响

目的探讨雌（Estrogen,E2）、孕激素（Progesterone,P4）对同期发情与自然发情小鼠子宫内膜中孕激素受体（Progesterone receptor,PR）分布的影响。方法45只同日龄雌鼠,根据处理方式的不同随机分为5组：自然发情组（对照组）、同期发情组、卵巢摘除组、P4处理组和E2处理组,5组小鼠在见栓后第4、6、8天分别取样后,采用免疫组织化学法观察小鼠子宫内膜中PR的分布变化情况。结果免疫组织化学染色结果显示,5个处理组小鼠子宫内膜的三种细胞中都有PR存在;同期发情组小鼠子宫内膜中三种类型细胞PR的表达与自然发情组差异有显著性（P〈0.05）;P4处理组小鼠子宫内膜中三种类型细胞PR的表达在见栓第4、6天显著低于卵巢摘除组（P〈0.05）;E2处理组小鼠子宫内膜腺上皮和间质中PR在第4、6、8天时都显著高于卵巢摘除组（P〈0.05）,而在腔上皮中则显著低于卵巢摘除组（P〈0.05）。结论同期发情处理与自然发情小鼠的子宫内膜上PR的分布,都受E2和P4的特异诱导而变化。     

L-亮氨酸对克隆的胰岛β细胞株INS-1E细胞分泌胰岛素的葡萄糖依赖性研究

目的:探讨L-亮氨酸对克隆的胰岛β细胞株INS-1E细胞分泌胰岛素的刺激作用及其葡萄糖依赖性。方法:INS-1E细胞经传代培养2 d后,在Krebs-Ringer缓冲液中37℃培养箱预培养30 min,再用含有不同浓度葡萄糖和不同浓度L-亮氨酸的改良Krebs-Ringer缓冲液培养60 min,然后留取上清液进行胰岛素测定。结果:L-亮氨酸在0.1~10 mmol.L-1范围不增加16.7mmol.L-1葡萄糖刺激的INS-1E细胞的胰岛素分泌,仅20 mmol.L-1的L-亮氨酸促进葡萄糖诱导的胰岛素分泌;10 mmol.L-1L-亮氨酸在1.1、3.3、6.7 mmol.L-1葡萄糖存在的情况下促进INS-1E细胞的胰岛素分泌,而在11.1、16.7、25 mmol.L-1葡萄糖存在的情况下无促进胰岛素分泌的作用。结论:本研究显示在无刺激胰岛素分泌的葡萄糖浓度条件下,10 mmol.L-1L-亮氨酸即显示了刺激INS-1E细胞分泌胰岛素的作用,在较高葡萄糖的条件下,10 mmol.L-1L-亮氨酸的作用减弱或消失。     

NRSE/RE-1 dsRNA诱导小鼠胚胎干细胞分化为NSE阳性的神经元样细胞

应用电打孔的方法将化学合成的NRSE/RE-1d sRNA转染小鼠胚胎干细胞,在去除LIF的条件下,直接接种培养,观察其分化情况,并对分化结果进行相关检测.结果显示分化细胞呈明显的神经样改变,免疫荧光显示NSE阳性率为（82.3±8.1）%.说明通过转染NRSE/RE-1d sRNA能有效地诱导小鼠胚胎干细胞向神经元细胞分化.     

Brain Tumor Stem-Like Cells Identified by Neural Stem Cell Marker CD15

In recent years, a small number of cells that have stem cell properties were identified in human gliomas called brain tumor stem cells (BTSCs), which were thought to mainly contribute to the initiation and development of gliomas and could be identified by the surface marker CD133. However, recent studies indicated that the expression of CD133 might be regulated by environmental conditions such as hypoxia and that there might be CD133^- BTSCs. Genetic mouse models demonstrated that some gliomas originated from transformed neural stem cells (NSCs). Therefore, we investigated the expression of CD15, a surface marker for NSCs, in tumor spheres derived from astrocytoma and ependymoma. CD15⁺ cells isolated from these tumor spheres had properties of BTSCs including self-renewal, multidifferentiation, and the ability to recapitulate the phenocopy of primary tumors. CD15 exhibited stable expression in long-term cultured tumor spheres, which sustained BTSCs properties, whereas CD133 expression decreased significantly in late passages. Furthermore, CD15⁺CD133^- cells isolated from early or late passages of tumor spheres showed similar characteristics of BTSCs. Examination of glioma samples by immunohistochemistry showed that CD15 was expressed in a subset of human brain tumors. Therefore, CD15 can be used as a marker of stem-like cells derived from brain tumors that might contain CD133^- BTSCs.     

正交试验法优选舒心胶囊原料药中挥发油的提取工艺

目的:探索舒心胶囊原料药中挥发油的提取工艺.方法:采用高效液相色谱法,用70%甲醇回流提取制样用作阿魏酸含量测定的方法学考察;用水蒸气蒸馏法提取挥发油,以挥发油提取率和阿魏酸含量为指标,采用L9(34)正交试验设计,筛选挥发油的最佳提取工艺.结果:舒心胶囊原料药中阿魏酸含量为0.070%.影响提取的主次因素为:浸泡时间>加水量>提取时间;优选得到的最佳提取条件为:药材不必浸泡,加10倍量水(v/w)后提取3h.结论:该工艺准确、稳定,重复性好.     

人ANKRD49基因真核表达载体的构建及其功能的初步研究和RNA干扰靶点的鉴定

目的: 克隆人ANKRD49基因并构建其真核表达重组体,利用构建成功的ANKRD49真核表达重组体对其进行功能的初步研究,并筛选和鉴定其RNA干扰靶点. 方法: 提取人肺腺癌细胞株A549总RNA,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)对ANKRD49进行扩增,扩增产物与真核表达载体p3×Flag-CMV-14同时进行双酶切,酶切产物连接后转化入感受态细胞Top10,阳性重组质粒p3×Flag-CMV-14/ANKRD49经菌液PCR、双酶切和测序鉴定正确后,用脂质体法(Lipofectamine^TM 2000)转染人胚肾细胞(HEK 293T),免疫印迹(Immunoblotting)和免疫荧光技术检测表达产物.免疫荧光法检测ANKRD49在宿主细胞内的定位.MTT法检测ANKRD49对宿主细胞的增殖作用.设计并合成针对人ANKRD49基因的RNA干扰靶点序列,与p3×Flag-CMV-14/ANKRD49共转染HEK 293T细胞后,Immunoblotting鉴定ANKRD49的RNA干扰靶点. 结果: RT-PCR结果显示,从A549细胞中扩增出约720 bp的片段.菌液PCR、双酶切及测序结果显示重组质粒p3×Flag-CMV-14/ANKRD49构建成功且序列正确.免疫荧光和Immunoblotting结果显示,在转染p3×Flag-CMV-14/ANKRD49的细胞中有ANKRD49的表达,蛋白质相对分子质量(Mr)约为27kDa,而转染空质粒组未见表达.MTT结果显示,ANKRD49对细胞增殖没有影响.共转染实验结果显示,1号和4号RNA干扰序列可以有效降低人ANKRD49的表达. 结论: 成功构建了真核表达重组体p3×Flag-CMV-14/ANKRD49,该蛋白质位于细胞核,不参与细胞增殖;同时鉴定出该基因的2个有效干扰靶点,为进一步研究其功能奠定了基础.     

异戊醇生物合成研究进展

在能源危机、环境危机和资源危机的影响下,发展新型环保替代能源越来越受到各国的重视。诸多研究证明,异戊醇与乙醇相比,具有更高的能量密度、更低的蒸汽压、更高的辛烷值等特点,更接近于汽油。就生产异戊醇所涉及到的各种技术问题,以及目前国际上研究生产异戊醇的工程菌和生物催化过程中的关键酶--酮酸脱羧酶的研究现状进行了综述,同时,也对异戊醇生物合成未来的发展趋势进行了展望。     

不同地理区域蛤蚧的RAPD分析

应用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术,对6个不同地域（河池、南宁、桂林、百色、越南、泰国）的蛤蚧（Gekko gecko）进行了遗传多样性和系统发育分析。21个RAPD引物共扩增了218个位点,片段大小在200～2000bD,其中184个是多态位点,占84．4％。地域之间的遗传距离指数在0．0112～0．9631,遗传相似性系数在0．3817～0．9888之间,根据遗传距离指数和遗传相似性系数,用NTSYSpc 2．10软件包中的UPGMA法构建了系统聚类图,结果均显示南宁地区、桂林地区、百色地区和河池地区先聚在一起,再和越南聚在一起,最后和泰国群体聚类。这与形态地理分布特征相一致。     

赤眼蜂属系统进化研究进展

赤眼蜂是一类重要的天敌昆虫,该属包括的种类达180多种,并且广泛地分布于世界各地。通过对形态特征的分析,赤眼蜂属的系统发育研究在不同的研究者中得到不同的分类系统。由于赤眼蜂的个体微小,仅04mm左右,现有的化石记录稀少,并且可用作系统发育研究的形态特征很少,导致该类群的系统发育研究仍有许多不清楚的地方。同时,近年来分子生物学的发展为赤眼蜂系统发育研究提供了很好的途径,也取得了一些共识。但仍然未能提出一套精确的、更可靠的分类系统。作者对近年来的赤眼蜂属系统进化研究进行了综述。     

温室瓜蚜种群动态的研究

瓜蚜AphisgossypiiGlover在温室黄瓜上的空间格局为聚集分布,分布的基本成分为个体群,聚集强度随密度的上升而下降;瓜蚜主要分布于中部和下部叶片。瓜蚜在温室黄瓜上呈指数增长,模型为Nt=0.1745e0.7414t(r=0.9676)。应用最优分割法将瓜蚜种群动态划分为3个阶段:初建期、发展期和高峰期。在种群初建期,有翅蚜开始迁入,数量较低,以扩散为主,分布不均匀,聚集强度较高;在发展期,瓜蚜种群不断繁殖扩散,分布日趋均匀,聚集强度逐渐下降;在高峰期,瓜蚜种群数量急剧增长到最高峰,分布至所有植株,聚集强度继续下降,此阶段后由于黄瓜植株受害枯萎,瓜蚜缺少食物而数量急剧下降。